（1）顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實際上色譜柱上所標的粒徑是一個平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實際上有一個顆粒分布度。這種分布度對柱反壓及柱效有重要作用。一般來說，平均顆粒度越小，顆粒分布度越小，色譜柱效越高，反壓亦越高。目前C18柱填料粒徑在4～10μm之間。

（2）孔徑是指填料顆粒間的孔間隙。一般所說的孔徑是指填料的平均孔徑。球形填料裝柱后平均孔徑分布比較窄，柱床結(jié)構(gòu)均勻，柱效高，重現(xiàn)性好；無定形填料平均孔徑分布較寬，柱床結(jié)構(gòu)不均勻，流動相線性速度不均勻，譜帶擴寬。平均孔徑的大小對分離大分子化合物有較大的影響，在分離含有較大分子的樣品時可能會有分子排阻效應(yīng)，或產(chǎn)生吸附效應(yīng)從而影響定量的回收率及準確度。因而在用反相色譜分離諸如蛋白或多肽樣品時應(yīng)考慮選用大孔徑(如30nm)的反相柱填料。孔體積作為硅膠多孔性的參數(shù)，在分離分析較大分子化合物時可作參考，選用較大孔體積的反相柱填料。

（3）化學鍵合相填料在高xiao液相色譜法中占有極重要的地位。它可以鍵合極性較大的有機基團，采用極性較小的溶劑作流動相。亦可鍵合極性較小的有機基團，選用極性較大的溶劑作流動相。C18色譜柱是以硅烷化鍵合型(Si-O-Si-C)存在的，這類鍵合反應(yīng)目前應(yīng)用zui為普遍。如以十八烷基三氯硅烷與全多孔型硅膠M-Porasil-C18反應(yīng)生成烷基化學鍵合相，商品名為M-Bondapak-C18。

（4）碳含量即填料中的含碳量。傳統(tǒng)的測量技術(shù)是將填料加熱到碳氫鍵斷裂，然后通過測定損失的重量或形成的二氧化碳來計算碳含量。可以通過增加碳鍵的長度或增加鍵合密度來增加碳含量。碳含量增加，柱子的保留值增加。鍵合相的色譜行為與鍵合密度有關(guān)，也與硅膠的密度及填料的表面積有關(guān)，填料的密度越高，填柱所需的硅膠量越多，柱子的含碳量也越高。如果用2種不同密度相同碳含量的填料填充柱子，其保留行為將明顯不同。因此，單獨以碳含量來預測色譜行為是不夠的。

（5）C18硅烷化試劑是一個大于2nm大分子，因此會與已鍵合在相鄰的硅醇基上的C18硅烷化試劑產(chǎn)生嚴重的立體位阻。其結(jié)果導致在硅膠表面有大量的殘留硅醇基沒有與硅烷化試劑反應(yīng)，這些極性的硅醇基在yi定色譜條件下會與堿性化合物相互作用引起峰形拖尾，從而可影響定量分析結(jié)果。這些問題在yi定程度上可以通過烷基化處理加以克服。烷基化處理是在鍵合相上完成的獨立反應(yīng)，以減少在硅膠表面的硅醇基。烷基化處理采用小分子(如三jia硅烷)的試劑，其空間位阻遠小于C18基團。大多數(shù)固定相jin有30%可覆蓋的鍵合位置。據(jù)報道，通過某些極活躍的化學試劑及te殊的反應(yīng)條件，zui高的覆蓋量可達50%。很好地了解硅膠鍵合相的物理特性將有助于在高xiao液相色譜的反應(yīng)中選擇合適的色譜柱。表面上看C18柱雖然化學官能團相同，而實際上不同品牌的C18柱性能可能有很大差別，從而產(chǎn)生不同的分離結(jié)果。

2. C18柱的規(guī)格對色譜柱的影響　

柱填料的選擇關(guān)系到色譜分離的可能性，而柱規(guī)格的選擇直接影響分析速度、分離能力、檢測能力及每次分析的溶劑消耗等。柱規(guī)格包括兩方面：柱內(nèi)徑和柱長度。柱內(nèi)徑，分析型一般為2～6 mm,制備型20 mm，大者可達80 mm；柱長度，分析型5～30 cm，制備型15～50 cm。一般來說，柱內(nèi)徑不影響分離度與分析時間的關(guān)系。今天，柱技術(shù)已發(fā)展到不同柱內(nèi)徑的柱子能夠具有相同的性能。不同內(nèi)徑的柱子又各具特點，對相同的分析時間和分離度來說，內(nèi)徑大的柱子比內(nèi)徑小的柱子多消耗溶劑。另一方面，較小內(nèi)徑的柱子對相同的檢測信號來說所需樣品量亦較少。因此，在樣品量有限時，可使用小內(nèi)徑柱。柱長度增加雖可改善分離效果，但阻力也隨之增加，bi須提高入口壓力。柱壓是同時影響增加分離度和減少分析時間的主要障礙。分離度、分析時間及柱壓三者相互制約，選擇好其中兩者，則第3個因素也就選好了。長柱可以給出高分離度，短柱可提供快速分離，我們可以根據(jù)樣品情況去選用合適的色譜柱。

3. C18柱選用的基本原則　

（1） 選用經(jīng)過烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。

（2）選用含碳量高的柱子，增加保留值。

（3）選用較短的柱子(如15 cm，7.5 cm)。

（4）選用小顆粒度的填料。

（5）對分子量大的組分選用大孔徑填料的柱子。